学界研圈
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161.3步，教你玩转紫外分光光度计！
[摘要]：紫外可见分光光度计是实验室普及率最高的一类光谱仪器。由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广，最重要是分析成本低、操作简便、快速。因此，长期在分析领域扮演很重要的角色。但我就会因更换光源而烦恼，每次数据有差别，都觉得是光源惹得祸！相信很多小伙伴也有这样的烦恼，今天咱们就来解析光源寿命的一些问题，并附上紫外分光度计使用故障排除方法总结。01紫外可见分光光度计原理结构图在紫外可见分光光度计中，... [发表时间：2024/2/1 15:50:00]
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162.WB实验曝光显出多个条带，蛋白大小跟报道的分子量不一致，是不是非特异带？
[摘要]：“出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，这两种情况需要分开讨论：第一种情况：蛋白转录及翻译后的修饰，该因素是引起杂带的最常见原因。转录后，由于选择性剪切的作用，同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白，这类蛋白称为该蛋白的剪接体。在UniProt查询蛋白时，可以在“Sequences”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms。在进行实验前，需要比对每个剪接体造成的变化是否影响了目标蛋白的对应结构域，进而... [发表时间：2024/2/1 15:48:41]
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163.常用蛋白标签特点（二）
[摘要]：蛋白标签是利用DNA体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。常用的蛋白标签包括谷胱甘肽S-转移酶（GST）、麦芽糖结合蛋白（MBP）、硫氧还蛋白（Trx）、链霉亲和素（SA）、多聚组氨酸（Poly-His）、小分子泛素样修饰蛋白（SUMO）和血凝素标签（HA）等。1蛋白标签类型常见蛋白标签主要分为三类，包括亲和标签、表位标签和荧光标签。1.... [发表时间：2024/2/1 15:47:26]
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164.干货丨实验室质量控制常用的10大方法
[摘要]：实验室质量控制如何做？一起来看这些方法！标准物质监控1.1质控过程通常的做法是实验室直接用合适的有证标准物质或内部标准样品作为监控样品，定期或不定期将监控样品以比对样或密码样的形式，与样品检测以相同的流程和方法同时进行，检测室完成后上报检测结果给相关质量控制人员，也可由检测人员自行安排在样品检测时同时插人标准物质，验证检测结果的准确性。1.2适用范围一般可用于：仪器状态的控制、样品检测过程的控制、... [发表时间：2024/2/1 15:46:30]
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165.酵母双杂交原理和载体的选择
[摘要]：酵母双杂交系统(yeasttwo-hybrid)以酵母遗传分析为基础，研究反式作用因子之间相互作用对真核基因转录调控影响的实验系统。其最有价值的应用是用BD-X筛选由AD-Y构成的cDNA文库，以获得新的蛋白质之间的相互作用，并分析研究新的基因。酵母双杂交不仅可用于鉴定新的蛋白质相互作用，证实可疑的相互作用，确定相互作用的结构域，而且可直接获得编码相互作用的蛋白的基因。1酵母双杂交实验原理酵母双杂... [发表时间：2024/2/1 15:45:54]
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166.实验室超纯水存放的要求
[摘要]：1、即取即用：超纯水取水后很容易遭到环境污染，所以使用前取水(即取即用)方式时最合适的。只有把超纯水与环境接触的时间缩到极短，才能够获得纯度极高的超纯水。2、存放时间：在配置高纯度的化学试剂时，尽量不要使用长时间储桶中存放的超纯水，因为储桶经长时间使用后，会因杂质、微生物的污染而造成水质的劣化，超纯水像这种水，在使用时已经不再是超纯水。3、纯水储桶最好安装空气过滤器，防止环境因素造成的污染。4、储... [发表时间：2024/2/1 15:45:21]
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167.实验技巧 | 一文理清免疫荧光实验流程和常见问题
[摘要]：免疫荧光（immunofluorescence）是一种常用的光学显微术，即用荧光显微镜来观察细胞中的特定生物分子。免疫荧光依赖于抗体抗原的特异性结合，然后通过直接标记或间接标记方法使用荧光分子指征抗体-抗原结合的位置，以确定目标生物分子在细胞中的位置、丰度和分布情况。免疫荧光实验流程1.固定固定液种类：有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮等）；交联剂（4%PFA、10%中性福尔马林），固定液的选择取决于被研... [发表时间：2024/2/1 15:44:39]
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168.细胞接毒操作步骤及注意事项
[摘要]：1操作步骤1.准备细胞：选择适当的细胞系，培养并使其达到适当的生长状态。2.准备病毒：根据你需要的病毒和浓度，制备好病毒溶液，如腺病毒、逆转录病毒等。3.接毒：当细胞长到合适密度时，就可以进行接种（建议在细胞传代48h内进行接种，细胞密度达80-90%左右进行）。移除先前的培养液，用1*PBS洗2-3次，移除残留的PBS，然后加入适当浓度的病毒溶液，一般接毒量按最后所需加入维持液体积的10%来计算... [发表时间：2024/2/1 15:43:24]
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169.如何选择流式抗体？
[摘要]：由于在流式细胞实验过程中，荧光抗体对单细胞悬液的标记效果直接影响实验的数据质量。因此，需要考虑各种影响流式抗体品质及检测效果的因素，例如抗体特异性、荧光素信号强弱、荧光素标记方式、同型对照等。1必须满足抗体选择的基本条件流式抗体本身也是抗体，所以选择流式抗体一定要满足抗体选择最基本的条件：目标蛋白特异性，反应种属以及应用实验。｜多克隆抗体与单克隆抗体的比较2注意荧光标记方式流式抗体荧光标记的方式包... [发表时间：2024/2/1 15:42:47]
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170.WB条带出现各种状况? 原因分析和解决方法在这里！
[摘要]：Western Blot虽是实验室最常用的蛋白分析技术，但是由于它步骤繁琐、操作流程长、影响因素多，所以，导致我们在做实验时会遇到各式各样的问题。今天我们总结了一些WB实验中经常遇到的各种“奇葩”条带问题，并为你推荐了常用的解决方法，希望对大家有所帮助。一、目标条带没有信号 原因分析解决方法样品中可能含有蛋白酶，使蛋白样品分解成小分子。添加蛋白酶抑制剂。目标蛋白浓度过低（低于检测下线）。力加大上样... [发表时间：2024/2/1 15:41:52]
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