学界研圈_万维书刊

181.二氧化碳培养箱—细胞培养摇篮

[摘要]：一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统（它是人体血液中最重要的pH缓冲系统），所以大多数培养液用它来保持稳定的pH。用粉末配制培养液时，常常需要加入一定量的碳酸氢钠。对大多数以碳酸盐作为pH缓冲系统的培养液而言，以为了维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的二氧化碳的浓度。同时细胞培养的器皿需要一定程度的透气，... [发表时间：2024/2/1 15:19:20]
182.19个细胞免疫荧光关键点详解

[摘要]：免疫荧光技术是标记免疫技术中发展最早的一种，是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术，包括荧光抗体法和荧光抗原法，但在实际工作中荧光抗原技术应用较少。细胞免疫荧光染色是免疫荧光技术在细胞中的应用。01技术特点优点：特异性强、敏感性高、速度快。缺点：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序也还比较复杂。02免疫荧光染色原理主要原理：利用抗原抗体之间的特异性结合来... [发表时间：2024/2/1 15:18:37]
183.为什么要养成配mix习惯？

[摘要]：一定要混成Mix吗？不混不行吗？感觉有的时候一个一个加还快一点，那为什么还要混为Mix再加样呢?1.便于吸出微量试剂：比如；有些酶类试剂，每管只加0.1微升，这个时候扩大体系就很重要2.避免重复性步骤：在实验过程中，重复次数越多，就意味着失败的概率会增加，所以，为了避免实验冗余步骤，混成Mix再一次性加样最为合适3.保护试剂安全：再用酶类试剂举例，如果一个一个加的话，那么试剂暴露在室温的时间就会增... [发表时间：2024/2/1 15:17:58]
184.师姐走心整理的细胞转染攻略

[摘要]：什么是细胞转染？细胞转染（Transfection）是指将外源性基因（如DNA、RNA、蛋白质等）导入到细胞内的技术。转染的目的是产生重组蛋白，或特异性增强或抑制转染细胞中的基因表达。随着基因和蛋白功能的深入研究，转染已经成为科研实验中最常用的技术手段之一。研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。细胞转染的分类根据导入的核酸存在于宿主细胞的时间长短，可以分... [发表时间：2024/2/1 15:17:24]
185.手把手教你流式样本制备

[摘要]：实验结果为何不尽人意，追本溯源后样本制备/处理是杀手！我们都知道流式样本制备作为流式细胞术至关重要的一环，对实验的成败有着举足轻重的作用。下面小编将流式细胞术中常见的样本制备方法给大家做一个小小的总结。让你完美制备实验样本，实验也能快人一步！！！图1.流式实验流程示意图样本制备流式细胞术检测的样本为单细胞悬液，因此，悬浮细胞或外周血细胞在流式分析时简便、快捷。对于贴壁细胞及实体组织在进行流式染色前... [发表时间：2024/2/1 15:16:34]
186.看这里，你想不到的PCR问题总结

[摘要]：1假阴性PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质。②模板中含有Taq酶抑制剂。③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白。④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要... [发表时间：2024/2/1 15:14:58]
187.实验中培养基和玻璃器材灭菌方法解读

[摘要]：培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。灭菌的方法，通常可以分为四大类：1、加热灭菌：包括直接灼烧灭菌、干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌和煮沸消毒；2、过滤去菌；3、射线灭菌和消毒；4、化学药剂灭菌和消毒。在本实验中，介绍培养基和玻璃器材灭菌有关的部份灭菌方法。1干热灭菌法（即热空气灭菌法）干热灭菌一般是利用电热烘... [发表时间：2024/2/1 15:14:17]
188.【五分钟讲实验】如何优化ELISA实验？

[摘要]：酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的基于抗原和抗体之间特异性键的分析免疫化学测定。ELISA实验优化过程中应测试许多因素，例如用于包衣的抗原或抗体的浓度、温度、各个步骤的持续时间、包被缓冲液的类型，例如磷酸盐缓冲盐水（PBS）或碳酸盐缓冲液）、样品制备方法（有或没有EDTA、去互补、血清或血浆或整个样品）。平板饱和也是一个需要优化的步骤，例如不同浓度的牛血清白蛋白（BSA）、脱脂奶粉或来自不... [发表时间：2024/2/1 15:12:35]
189.RT-PCR完整攻略-原理介绍、引物设计、数据处理、绘图

[摘要]：1原理介绍定量逆转录PCR（quantitativereversetranscriptionPCR,RT-qPCR）是应用于以RNA作为起始材料的PCR实验中的一种实验方法。在该方法中，总RNA或信使RNA（mRNA）首先通过逆转录酶转录成互补DNA（cDNA）。随后，以cDNA为模板进行qPCR反应。RT-qPCR已被用于多种分子生物学的应用中，其中包括基因表达分析、RNA干扰验证、微阵列验证、... [发表时间：2024/2/1 15:11:52]
190.细胞裂解液配方和选择

[摘要]：细胞裂解液的目的：（1）利用去垢剂破坏脂质双分子层，破裂细胞；（2）溶解蛋白；（3）蛋白变性使其稳定；（4）抑制蛋白酶活性。常见的细胞裂解液成分： 50mMTris-HClpH7.4 （缓冲体系） 150mMNaCl （等渗体系） 1mMPMSF （蛋白酶抑制剂） 1mMEDTA （变性剂和稳定剂） 5μg/mlAprotinin （蛋白酶抑制剂... [发表时间：2024/2/1 15:10:43]

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