学界研圈
共71047条记录
-
201.基因表达调控看完这篇就懂了
[摘要]：在基因功能研究中常用两种基础策略，功能减弱或缺失，功能增强或获得。实现基因功能减弱，可以采用RNA干扰（RNAi）技术下调目的基因表达。在RNAi使用中，siRNA或shRNA的设计是关键。长度约为21bp的siRNA与蛋白形成RISC复合物，结合目的基因的mRNA，从而使其降解，达到降低基因表达水平的目的（注意RNAi是作用于mRNA水平）。但需要引起注意的是，如果目的基因在细胞中本体表达就较低... [发表时间：2024/2/1 14:49:14]
-
202.一文看透普通PCR七大要素
[摘要]：PCRPCR是一种能够在短时间内将单个DNA分子扩增数百万倍的生化过程。其扩增过程包括三个连续步骤：（1）变性，对双链DNA模板进行加热，使其解离；（2）退火，被称为引物的短DNA分子与目标DNA的侧翼区域结合；（3）延伸，DNA聚合酶沿着模板链将引物3’端进行延伸。将这些步骤重复（“循环”）25-35次，即可按指数方式获得精确的目标DNA拷贝（图1）。多年以来，PCR的基本原理一直未变，但随着D... [发表时间：2024/2/1 14:48:16]
-
203.实时荧光定量 PCR实验要点学习
[摘要]：实时荧光定量PCR，又称为定量PCR或qPCR，可以为测定样品中的靶标序列或基因数量提供简单、简洁的方法。实时荧光定量PCR数据的图形表示。Rn是报告基团染料的荧光除以惰性参比染料的荧光的比值；即，Rn是归一化到AppliedBiosystems™ROX™染料的荧光信号的报告基团信号。(图1-A)Rn根据PCR循环数进行绘制。（图1-B）ΔRn为Rn减去基线；(图1-C)扩增图显示对数(Δrn)随... [发表时间：2024/2/1 14:47:24]
-
204.Western blot实验避雷指南！
[摘要]：Westernblot是一个非常基础的实验，但是着实让我们头疼，即使是老手也挡不住WB实验的千锤百炼，懂得都懂，下面小编根据经验总结一篇WB实验过程会遇到的常见问题及解决方案，希望对正在做WB实验的小伙伴提供一个避雷参考！无条带1.蛋白表达量低：充分了解研究的蛋白，表达量低适当增加上样量，20-50μg。2.本底表达还是诱导表达，非特异性条带。3.样本提取蛋白使用蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂，并设置... [发表时间：2024/2/1 14:46:45]
-
205.质粒提取纯化柱与PCR产物纯化柱是否可以混用？
[摘要]：质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，当前通常用其来特指细菌、真菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程领域，质粒常常被当做基因的载体使用。在分子生物学中，质粒DNA被当做基因运载工具具有非常广泛的应用。在细菌中提取质粒DNA通常按照以下步骤进行:第一步，培养细菌，使质粒扩增;第二步，进行细菌的收集和裂解;第三步，质粒DNA的分离和纯化。在质粒DNA的提取过程中，其提取效果... [发表时间：2024/2/1 14:45:00]
-
206.实验成功的关键-PVDF膜的使用技巧
[摘要]：PVDF膜使用时要用甲醇浸泡？PVDF本质是一种疏水性的聚合物，在水溶液中不会浸湿。为了在水性缓冲液使用PVDF膜，首先必须将其浸泡在50%醇溶液中。甲醇、乙醇和异丙醇都适合浸泡这种膜。之后必须用水反复冲洗以去除醇类，经预处理的膜现在可以直接放入转印缓冲液中平衡。PVDF膜浸泡步骤？湿转：(1)将膜在甲醇中浸泡30秒。膜应均匀的从不透明变成半透明。(2)小心的将膜放入双蒸水中，浸泡2分钟。(3)小... [发表时间：2024/2/1 14:44:25]
-
207.蛋白实验常见问题
[摘要]：1、蛋白样品不能反复冻融；2、蛋白样品应加蛋白酶抑制剂，以增加蛋白的稳定性（建议最好能多加几中种蛋白酶抑制剂）；3、细胞水平要做WesternBlot，一般地5×106个细胞提取的蛋白够就足WesternBlot；4、如果目标蛋白是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂就要温和得多，建议提取后最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性；5、若转膜不完全，可以加大上样量，还有转移时你可以用降低电流延长时间，转膜液中... [发表时间：2024/2/1 14:43:41]
-
208.蛋白纯化9大方法
[摘要]：层析技术早在1903年就应用于植物色素的分离提取，各种颜色的色素从上到下在吸附柱上排列成色谱，也称色谱分离法。1931年有人用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体，显示了这一分离技术的高度分辨力，从此引起了人们的广泛注意。随着人们对层析技术的认识和实践的提高以及物理化学技术的发展，应用范围更加广泛，没有颜色的物质同样可用此法分离，这时的工作全是使用吸附剂的吸附层析法。自1944年应用滤纸作为固定... [发表时间：2024/2/1 14:43:09]
-
209.活体动物体内成像技术常见问题解答
[摘要]：01关于细胞标记和荧光素酶的特性1. 荧光素酶的发光是否需要激发光？荧光素酶的发光是生物发光，不需要激发光，但需要底物荧光素(Luciferin)。2. 荧光素酶的发光特性如何？荧光素腹腔注射老鼠后约一分钟后表达荧光素酶的细胞开始发光，十分钟后强度达到稳定的最高点。在最高点持续约20-30分钟后开始衰减，约三小时后荧光素排除，发光全部消失。最好的检测时间是在注射后15到35分钟之间3. 底物荧光素... [发表时间：2024/2/1 14:42:29]
-
210.实验动物灌胃给药操作方法及注意事项
[摘要]：经口灌胃给药方法是一种重要的动物给药途径，今天小编带大家一起学习不同动物灌胃给药的操作方法及注意事项。灌胃器具制作小鼠、大鼠、豚鼠：可以购买市面上特制的I2～l6号灌胃针，或者自制。自制方法包括将l2号普通注射针头去掉针尖，用细锉刀修整并changj磨光滑，有条件时可点焊成球型。连接1ml或5ml注射器即可制作大小鼠的灌胃器。豚鼠灌胃器可以采用大鼠灌胃器。家兔：取12号腰椎穿刺针。加工方法同小鼠、... [发表时间：2024/2/1 14:38:57]
热门文章
-
版权所有 Copyright@2009-2015| 豫ICP证合字09037080号
纯自助论文投稿平台 E-mail：eshukan@163.com