实验室细胞培养常见“误区”

以下文章来源于逍鹏生物 ，作者VivaCell&BI市场

01. 误区一

实验室的细胞是不是都从公司买的？不全是！

刚进实验室，师兄师姐给我的细胞

直接联系细胞商购买各种细胞

刚从隔壁课题组借了一盘细胞

细胞来源可能很多，但是我们需要确认的是：

了解课题研究目的，以及细胞的基本信息，

选择正确渠道购买优质细胞，并附质检报告

正确培养与传代，存储种子细胞便于后续研究

常用细胞来源分为：原代细胞分离与永生化细胞系。

原代细胞分离大概分为以下流程：

需要用到的试剂：

原代干细胞分离液（组织分离液）。

适用类型：

脐带、脂肪、胎盘、牙髓等多种原代分离的干细胞，以及主动脉内皮、绒毛膜等。

借来的细胞或名字相同的细胞，体系一样就可以养好！

02.

所有产品都一样，为什么细胞养不好？

细胞名字一样，培养体系应该不会有差别吧？

血清一样，换个基础培养基应该问题不大的吧？

开展细胞培养前，需要认真学习细胞的基本知识，了解不同来源细胞的培养特性。对于不同来源的同一种细胞，不同培养体系下的形态学、功能学等存在差异，需要验证是否符合研究需要后再开展大规模培养。借来的细胞需要适应环境与操作后再做功能学研究或者更换试剂等。

培养环境、人员操作、产品批间差等均有影响

请参考官方网站或文件，使用正确体系

不同细胞对基础培养基中一些成分适应性不同

☆   不论什么来源的细胞，都要按照正确的体系培养，才能获得可重复的实验结果！

03.

细胞复苏操作不及时，接种后观察不及时！

水浴锅的温度未到37℃就解冻细胞

同时操作多个冻存管，融化时间延长

冻存管未做保护直接全部浸没于水浴锅中

复苏后就等着细胞长满，期间不观察

这样的问题您有犯过吗？细胞冻存复苏讲究“慢冻快融”，当然快融的操作也很重要。不然只能是无用功。

水浴锅37℃解冻，最好不超过1 min

建议单管操作，避免交叉污染

冻存管置于无菌PE手套中，再浸没融化

根据细胞特性，复苏后及时观察细胞生长状态

04.  误区四

细胞一定要长满点再传代，或多传点长得快！

细胞一定要长满点再传代，或多传点长得快！

细胞要长到90%-100%才可以传代

细胞融合度80%左右仍继续培养

细胞传代密度高点，1传1或1传2

您是不是也是这样认为呢？

但是，以下问题您有考虑过吗？

细胞长期高密度生长，更容易老化

对数期细胞增殖速度快，容易聚团漂浮

细胞传代密度根据研究需要和细胞生长特性优化

05.

胰酶消化要等到细胞变圆才能终止，多吹打变成单细胞！

关于细胞消化以下做法是错误的示范手法：

接触新细胞培养，消化时间和其它细胞一致

消化10 min仍然未脱落，用力吹打

所有细胞都是很娇弱的，做好细胞消化，我们需要了解以下几点：

了解新细胞的特性再做培养与研究

难消化的细胞可放37℃温箱或换更强的消化液

细胞间隙明显，大片脱落可移动即可终止消化

有些细胞消化后不会变圆形，半沙状即可终止

NOTE：

×××  不是细胞形成单个圆形才算消化完全

×××  不是所有细胞消化后都会变圆形

转自：“医学科研小坑”微信公众号

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