干货分享/细胞培养-污染

体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而且培养基中加入的抗生素的抗污染作用有限，培养细胞一旦发生污染，多数将无法挽救。

交叉污染：由于细胞培养操作时，各细胞株所需的器具和试剂没有严格分开，往往会使一种细胞被另一种细胞污染（注意区别细菌污染）。目前，世界上已有几十种细胞都被HeLa细胞所污染，致使许多实验宣告无效。细胞污染使培养细胞的种类发生混乱，有些甚至可能由于污染的细胞具有生长优势导致原有的细胞增殖抑制，最终死亡，导致细胞种类不纯，无法用来进行实验研究。

1.如何辨别自己培养的细胞是否发生污染？

①细胞自身的形态

细胞生长缓慢，分裂相减少，甚至细胞增殖停止，分裂相消失；

细胞变得粗糙、轮廓增强；

细胞胞质中出现较多的颗粒状物质；

胞质中出现大量的堆积物，细胞变圆或崩解，从瓶壁脱落。

②造成污染的微生物形态

⑴真菌污染

真菌污染的种类很多，常见的有酵母菌、烟曲霉、白色念珠菌等，最常见的是酵母菌（图1）。酵母菌形态呈卵形或圆形，菌体透亮，生长速度较慢，散在细胞周边和细胞之间生长；倒置显微镜下可见在细胞之间有纵横交错穿行的丝状、管状及树枝状菌丝。    

图1 箭头所示位置为酵母细胞

⑵细菌污染

细菌污染较为常见的是大肠杆菌、白色葡萄球菌、假单孢菌等；高倍镜下可见杆状或球状的细菌在培养基中游动

⑶支原体污染等

支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去

⑷黑胶虫污染

低倍镜下观察时可见黑色小点，高倍镜下可看见黑色的小虫游来游去；对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理

2.一个微生物污染细胞实例图

下图为同一个MCF-7细胞系1传2的倒置显微镜图：

左图细胞呈上皮细胞样，无明显污染表现；右图：

1.有线性的虫在游动，考虑大肠杆菌污染

2.考虑为崩解的细胞膜

3.细胞明显粗糙，轮廓增强

4.有黑点在游动，考虑黑胶虫污染

3.细胞培养发生微生物污染后如何处理？

培养细胞的污染一旦明确，多数将无法清除，如果污染的细胞不具有重要价值，一旦发现污染后应该尽快弃之，以防污染扩大影响其他细胞。若有价值的细胞需要抢救，可以采取抗生素冲击、对热敏感的支原体加热、利用同种动物的免疫系统进行皮下接种等。

4.细胞培养如何避免微生物污染？

（1）在培养液中添加抗生素

可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。

（2）规范实验操作

养细胞的步骤很简单无非是换液、传代、冻存、复苏。但是具体有好多小细节需要注意....

（3）所有新购入或接入的细胞，必须及时保种冻存

一旦发生污染可重新复苏细胞，继续培养，这是抵御污染最直接有效的办法。

养好细胞的方法就一种，就是细心，在操作上下功夫

5.细胞培养如何避免细胞污染（交叉污染）？

①不同的细胞不要共享同一瓶培养基；

②在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分；

③每次操作最好只处理一种细胞，多种细胞多种操作一起进行时易发生不同细胞间的污染；    

④在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞    

文章来源于影像组学

转自：“博舜科研”微信公众号

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