PBJ | 肯尼亚/美国科研人员联合开发出Cas-CLOVER基因编辑新工具，在香蕉中实现高效、精准编辑

锌指核酸酶（ZFN），转录激活因子样效应子核酸酶（TALEN），以及CRISPR-Cas系统是目前常用的三种基因编辑工具，其中CRISPR-Cas9系统使用最为广泛，已经成功应用在植物、动物及微生物相关的研究中。但是基于CRISPR-Cas9系统产生的产品容易涉及知识产权纠纷，其商业化发展和推广受到限制，因此，开发独立的，多样化的基因编辑系统就显得尤为重要。

近期，肯尼亚国际热带农业研究所联合美国Demeetra农业生物科技公司，开发了全新的基因编辑工具Cas-CLOVER，相关研究成果以短文的形式发表在Plant Biotechnology Journal上。

在报道中，研究人员首先建立了全新的核酸编辑工具，其中包括失活的dCas9和全新的核酸内切酶Clo51，研究人员将该编辑工具命名为Cas-CLOVER。与传统的编辑工具不同的是，Cas-CLOVER在体内形成二聚体，并使用两个sgRNA对编辑器进行引导，提高了基因编辑的准确性，同时由两个sgRNA引导产生的基因编辑理论上将产生11-31bp不等的编辑类型，大大提高了基因型多样性（图1）。

研究人员进一步以香蕉中的番茄红素脱氢酶（MusaPDS）基因为研究对象，探究了Cas-CLOVER基因编辑工具的可行性及后代编辑效率（图2）。

通过构建pDMT_Cas-CLOVER_MusaPDS双元载体并进行遗传转化（图3），研究人员获得了5个独立的遗传转化事件，在这些黄化苗后代中，分别出现了17-91bp不等的碱基缺失，证明Cas-CLOVER系统可以作为一种全新的基因编辑工具进行精确的基因编辑（图4）。

参考文献：

https://onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1111/pbi.14100

https://demeetra.com/gene-editing-in-plants-is-stable-efficientand-reliable-with-cas-clover-the-clean-alternative-to-crispr-cas9/

转自：“植物生物技术Pbj”微信公众号

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