Real-time PCR 实验注意事项

一、实验中的一些好习惯

1. 加入试剂之前,把它混匀一下，以免放置时间长了浓度不均

2. 移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性

3. 一定要记着关水浴箱，切记切记

4. 多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了

5. 所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因

二、常用的 RNA 酶抑制剂有：

1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）

2. 异硫氰酸胍

3. 氧钒核糖核苷复合物

4. RNA 酶的蛋白抑制剂（RNasin）

5. 其它：SDS、尿素、硅藻土等对 RNA 酶也有一定抑制作用。

因为 DEPc 不加选择的修饰蛋白质和 RNA，因此在分离和纯化 RNA 过程中不能使用，而且它与一些缓冲液（例如 Tri）不能相容。

在所有 RNA 实验中，最关键的因素是分离得到全长的 RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA 酶）的污染。

RNA 酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。研究人员造成的污染 RNA 酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此进行 RNA 实验时应勤换手套。

转自：“生物学霸”微信公众号

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