细胞复苏又失败？ 这 7 个原因请速速自查

回忆起当年在实验室，拿回细胞后，传代、冻存后复苏过几次都没什么问题，突然因实验室孵箱污染，清洁消毒细胞室后，重新复苏，结果连续复苏 6 支，细胞均未贴壁，到底是为啥？

后来，这一谜团被师兄给破解——可能是冻存液出现了问题！于是，我顺着师兄给的建议，一一排查，终于成功复苏了细胞，今天，我也把自查的要点分享给大家：

细胞复苏出现问题！

以下 7 点需要自行检查：

1、冻存的时候是不是消化的时间过长？太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。

2、冻存液好不好？是甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。

3、你的冻存液的量加的是不是太多？

4、冻存的时候是不是把 DMSO 混均匀？这个有一些影响，但不算太大。

5、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格？

6、是否是细胞污染？

7、细胞在冻存前是否过密？

除了以上复苏问题，平时的细胞培养、传代、以及基础实验也容易出现各种各样的问题。

转自：“丁香学术”微信公众号

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