Western Blot在肿瘤治疗中的应用

Western Blot即蛋白质印迹法（免疫印迹试验）。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。

目前，我国恶性肿瘤发病、死亡数持续上升，每年恶性肿瘤所致的医疗花费超过2200亿。WB在肿瘤治疗方面发挥着巨大的作用，有利于研究人员在蛋白水平充分了解细胞凋亡途径，从而更好地研发治疗肿瘤的新途径和新药物。

（1）来自自然杀伤细胞（NK）的外泌体（NEO）在免疫调节方面具有多种功能，是一种很有前途的抗肿瘤纳米生物制剂。但是要实现有临床意义的治疗结果，需要显著增强其免疫调节能力。北京理工大学黄渊余副教授团队开发了一种可光激活的沉默NK衍生外泌体（LASNEO）系统，首先通过将亲水siRNA电穿孔到NK细胞衍生外泌体（NEO）中，然后与Ce6孵育。给药后，LASNEO可通过在肿瘤组织中引入NK细胞样的细胞毒性，直接诱导肿瘤细胞死亡。同时，在被肿瘤细胞内化后，ROS将在660 nm激光照射下产生，这不仅实现了有效的PDT，而且促进了巨噬细胞重编程为M1表型和成熟的树突状细胞(DC)。相关文献以“Conscription of Immune Cells by Light-Activatable Silencing NK-Derived Exosome (LASNEO) for Synergetic Tumor Eradication”发表在《Advanced Science 》。

Western Blot结果表明，外泌体（CD9，CD63，CD81，肿瘤易感基因101 （TSG101））和Fas-L的共同标记物在NEO上显示，证明成功制备了高质量和高纯度的NEO（左上）。在验证了NEO对CT26和HepG2-Luc的肿瘤细胞杀伤能力后（右上），为了证实NEO是否继承了NK细胞的细胞毒性调节能力，进行了Western Blot实验（下）。CT26细胞孵育24 h后，用Western Blot检测CT26细胞中PARP-1、水解PARP-1和半胱天冬酶-3（caspase-3）的表达水平。结果显示，PARP-1和半胱天pase-3呈剂量依赖性显著下调，水解PARP-1呈剂量依赖性显著上调。这些结果表明，FasL和TRAIL在NEO上分别与Fas和TRAILR结合，激活了caspase-8和下游凋亡途径。

 （2）癌症是世界上最传统的死亡原因之一。多模式治疗是癌症治疗的主要方法，包括手术、放疗和化疗。癌症治疗的一个关键障碍是肿瘤细胞对由基因突变和基因异常引起的多种治疗形式的耐药性。基因治疗是解决这一问题最有前途的方法和最有效的策略之一。伊朗马什哈德医科大学的Seyed Mohammad Taghdisi教授团队设计了两个基于天然聚合物的治疗性FOXM1适体和CRISPR/Cas9基因组编辑的高效平台，通过在水性介质中自组装来实现体外和体内的有效癌症治疗。将AS1411 Apt和HA自组装到纳米载体表面，通过癌细胞表面过表达核仁和CD44促进CRISPR/Cas9转运到癌细胞中。此外，AS1411还可以通过与其配体核仁蛋白结合，将纳米颗粒运送到癌细胞的细胞核中。该系统以基因组编辑质粒和CS为核心，HA为壳层，并装饰有AS1411 Apt。相关文献以“A novel dual-targeting delivery system for specific delivery of CRISPR/Cas9 using hyaluronic acid, chitosan and AS1411”发表在《Carbohydrate Polymers 》。

敲除过表达的FOXM1可以引发癌细胞凋亡，该研究团队通过Apt-HA-CS-CRISPR/ Cas9敲除FOXM1后，研究了凋亡蛋白（Bax、Bcl-2、VEGF和P53）的表达水平。通过Apt-HA-CSCRISPR/Cas9编辑基因组后，肿瘤增殖相关蛋白（Bcl-2和VEGF）显著降低（p < 0.009），而凋亡调节因子P53和Bax显著升高（p < 0.009）。CRISPR抑制Bcl-2可导致半胱天冬酶的激活，有利于细胞凋亡。并且Bax的增加会导致线粒体外膜（MOMP）的通透性，并释放细胞色素c，进一步促进细胞凋亡。

转自：“医学科研小坑”微信公众号

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