常用缓冲液配置-PBS缓冲液
2024/2/1 16:00:41 阅读：75 发布者：
在生化实验中，经常会用到PB缓冲液和PBS缓冲液，那什么是PB和PBS？
PB 是phosphate buffer的缩写，一般称为“磷酸盐缓冲溶液”，依靠磷酸缓冲对（H2PO4-和HPO42-）起到维持溶液pH值的作用，阳离子则一般是Na+或K+。
PBS 是phosphate buffer saline的缩写，中文通常称为“磷酸盐缓冲盐溶液”，更准确地译名应该是“磷酸盐缓冲生理盐水”，是生化实验广泛使用的一种缓冲溶液。通常是在PB的基础上加入0.9% NaCl，拥有和人体体液类似的渗透压和pH值。有时为了满足其它需求，需加入K+、Ca2+或Mg2+。这个时候就需要用到D-PBS（Dulbecco′s Phosphate Buffered Saline，杜氏磷酸盐缓冲盐水），相对于PBS，其中磷酸二氢钾浓度降低，避免与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子生成沉淀。
缓冲pH范围:
磷酸缓冲液的缓冲pH值范围非常广泛，可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。
酸性缓冲液：可直接用NaH2PO4或KH2PO4，pH范围在1-5；
碱性缓冲液：可直接用Na2HPO4或K2HPO4，pH范围在9-12；
中性缓冲液：用等浓度的NaH2PO4和Na2HPO4或者等浓度的KH2PO4和K2HPO4溶液按照不同比例进行混合，pH在5.5-8.5。
浓度计算:
通常所说的磷酸缓冲液的浓度，比如0.1M、0.01M，指的是溶液中含有的所有磷酸根离子的浓度，包括解离的和未解离的，而不是Na+或者K+的浓度。正是因为如此，在配制中性缓冲液时，用等浓度的H2PO4-和HPO42-溶液混合，并不影响磷酸根离子的浓度。
配置方法:
PBS的配置方案有很多，Cold Spring Harbor Protocols Recipe如下所示：理论上需要调pH值，但在实际操作中，用超纯水配置后，pH就在7.2-7.24之间，通常不用调pH。
组分 | 终浓度(1×) | 1×用量(g/L) | 10×用量(g/L) |
NaCl | 137 mM | 8 | 80 |
KCl | 2.7 mM | 0.2 | 2 |
Na2HPO4 | 10 mM | 1.44 | 14.4 |
KH2PO4 | 1.8 mM | 0.24 | 2.4 |
1×PBS配置方法（1L）：按上表称取物质，溶于800ml水中，然后定容至1L。
由于使用量比较大，频率比较高，所以我们一般都会配置10×或者20×的母液，使用的时候直接稀释，这样比较方便。
10×PBS配置方法（1L）：按上表称取物质，溶于800ml水中，然后定容至1L。使用的时候稀释10倍即可。
各种pH值的 0.2M PB（100ml）配方 ：
pH | 0.2 M HPO4(mL) | 0.2MH2PO4(mL) | pH | 0.2 M HPO4(mL) | 0.2 M H2PO4(mL) |
5.85.96.06.16.26.36.46.56.66.76.86.9 | 8.010.012.315.018.522.526.531.537.543.549.555.0 | 92.090.087.785.081.577.573.568.562.556.551.045.0 | 7.07.17.27.37.47.57.67.77.87.98.0 | 61.067.072.077.081.084.087.089.591.593.0
94.7 | 39.033.028.023.019.016.013.010.58.57.05.3 |
Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·12H2O分子量 = 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = 156.03，0.2 mol/L溶液为31.21克/升。
磷酸缓冲液优缺点:
优点：易配制各种浓度的缓冲液；适用的pH值范围宽，可配置各种pH值的缓冲液；pH受温度影响较小；缓冲能力强，缓冲液被稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。
缺点：浓度偏高时易与常见的钙离子Ca2+、Mg2+及一些重金属离子缔合形成沉淀；会抑制某些生化反应过程，如抑制某些酶(磷酸酯酶等)的催化过程。
题外：PBS的配置方案有很多，大同小异，主要原理是提供等渗透压和维持pH 7.2--7.4。
公司/组织 | NaCl | KCl | Na2HPO4 | KH2PO4 |
Thermo | 137mM | 2.7 mM | 8 mM | 2 mM |
HyClone | 154 mM | 0 mM | 5.6 mM | 1.06 mM |
Cold Spring Harbor | 137 mM | 2.7 mM | 10 mM | 1.8 mM |
生工 | 136.89 mM | 2.67 mM | 8.1 mM | 1.76 mM |
碧云天 | 135mM | 4.7mM | 10mM | 2mM |
索莱宝 | 136 mM | 2.6 mM | 8 mM | 2mM |
转自：“Super Lab”微信公众号
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