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HEK293系列细胞都包括哪些细胞?迭代进化

2023/12/20 15:36:02  阅读:40 发布者:

以下文章来源于医药速览 ,作者医药速览

293细胞的衍生细胞可分为数种,比如293T细胞,293A细胞,293E细胞,293FT细胞等等。简而言之,293A是用来包腺病毒的,293T/FT是用来包慢病毒的。293细胞非常容易转染,是实验室最常用且高效的表达目的基因的细胞株。

HEK293:最原始的HEK293细胞来源于一个夭折的人类胚胎肾细胞(1973年)。HEK293细胞是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒DNAAd5 DNA)而得到的永生化细胞,表达稳转的Ad5 DNA的基因,不易贴壁,表达E1A蛋白。

293T: 293T细胞由HEK293细胞衍生而来,是SV40 large T抗原稳转得到的细胞株,贴壁不牢。293T细胞还表达E1A蛋白,SV40 large T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。293T细胞容易转染,用磷酸钙、PEI或脂质体转染,效率均可达90%以上。除用于基因表达及蛋白生产外,还用于慢病毒、逆转录病毒及腺病毒的包装。

293T/17细胞是293T细胞中共转染pBNDpZAP质粒而获得的具有G418耐受的细胞系。该细胞系仍保留高转染效率的特点。

293T/17SF细胞是在293T细胞中转入EBV基因形成的转化细胞系,该细胞系主要用于瞬时转染及蛋白表达,类似于293E细胞的作用。

293H细胞是293细胞驯化后得到的、能够在无血清培养体系下快速生长、具有高转染效率及高效蛋白表达性能的细胞系。该细胞系贴附牢固,主要用于噬菌斑检测等。

293A (Adherent)细胞是293细胞的衍生株,倾向于形成单层细胞(Monolayer)。在进行病毒滴度测定的空斑试验(plaque assay)时,293A细胞是均匀的单层,没有细胞重叠和间隙。

293E细胞是293-H细胞中插入EBNA-1基因的细胞系,该基因能够稳定表达EBV病毒的EBNA1蛋白,含有EBV复制起点(oriP)的重组表达质粒。

293-6E细胞是在293-H细胞中插入截短过后的EBNA-1基因的细胞系,其能够在无血清培养基中高表达生产蛋白及病毒载体。293-6E细胞为悬浮状态,主要用于蛋白表达。

293F细胞是一类能够在无血清中高表达蛋白的野生型293细胞系(FFast-growth的首字母)。

293FT细胞是在293F细胞系中插入pCMV-SPORT6-TAg.Neo质粒的转化细胞系,贴壁生长不牢,为疏松贴壁状态,能够快速增殖,易转染,能够用于慢病毒载体的生产。293FT细胞能制造高滴度慢病毒。ViraPower™ 表达载体和 ViraPower™ 慢病毒包装混合物 (ViraPowerLentiviral Packaging Mix) 共转染进 293FT 细胞中时,可形成高水平的病毒 RNA 及包装所需的 Gag/pol Rev 蛋白。

293FTM细胞来源于Flp-InTMT-RETM293细胞,该细胞系中稳定转染了ecotropic receptor质粒及MAPPIT (mammalian protein-protein interaction trap)报告质粒。该细胞系主要用于蛋白互作的筛选。

293Ssuspension)细胞是被驯化成能够悬浮培养且能够耐受低钙离子培养条件的293细胞系。

293SG293S细胞用甲基磺酸乙酯诱变处理,蓖麻毒素选择后再转染pcDNA6/TR质粒得到耐受蓖麻毒素的细胞系。该细胞系为悬浮培养,缺少N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶 (N-acetyl-glucosaminyl transferase I, GnTI)活性,可促进蛋白的Man5GlcNAc2N-聚糖型糖基化修饰。该细胞系常用于同源的N-糖基化蛋白的表达。此外,该细胞系中具有四环素表达抑制基因,可用于四环素诱导的蛋白表达研究。

293SGGD细胞系是在293SG转染pcDNA3.1-zeo-STendoT质粒的细胞系,其主要用于糖基化工程研究中。

根据各自的用途归纳下来,293细胞主要的细胞系可分为293T细胞-瞬时转染,蛋白表达,293H/A细胞-噬菌斑或空斑实验、293E细胞-重组蛋白的生产、293F细胞-慢病毒的生产和293S细胞-糖基化蛋白的表达。

注:HEK293细胞系的衍生与发展

文献参考:

Genome dynamics of the human embryonic kidney 293 lineage in response to cell biology manipulations[J]. Nature communications, 2014, 5: 4767.

Hu J, Han J, Li H, et al. Human Embryonic Kidney 293 Cells: A Vehicle for Biopharmaceutical Manufacturing, Structural Biology, and Electrophysiology[J]. Cells Tissues Organs, 2018, 205(1): 1-8.

转自:“医学科研小坑”微信公众号

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