高品质高质量病理检测(二十三)—HE染色
2023/9/11 15:45:20 阅读:51 发布者:
一、染色原理
苏木精 — 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木素染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。
二、染色步骤
石蜡切片组织包埋,切片和HE染色
1.取新鲜组织厚度不超过5mm,置于4%多聚甲醛或者10%的中性福尔马林固定大于48h后,取出置于包埋盒中,并用铅笔做好标记;
2.固定后自来水冲洗1-2h;
3.脱水透明 --二甲苯(10min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min)→95%乙醇(5min)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →80%乙醇(5min) →75%乙醇(1h) →85%乙醇(1h) →90%(3次,共1h) →95%乙醇(3次,共1h) →无水乙醇(3次,共1h) →二甲苯(2次,共1h);
4.石蜡浸泡,3次,共2h,最后将包埋盒置于新蜡中用包埋机包埋;
5.包埋结束后,待蜡块冷却后,将蜡块置于冰上,于切片机上切片,切片厚度一般为4-5um。漂片温度为42℃,摊片温度为65℃左右,待切片上多余的石蜡烤干后,将切片置于切片盒中室温保存;
6.石蜡切片放置在60℃恒温箱中烘烤2-3h,防止脱片;
7.脱蜡和水化:二甲苯(10min)→二甲苯(20min)→无水乙醇(5min)→95%乙醇(5min)→90%(5min)→85%乙醇(5min) →75%乙醇(5min);
8.蒸馏水冲洗2次5min;
9.Mayer氏苏木素,1min;
10.自来水冲洗,5-10min;
11.75%盐酸酒精,1-2min,自来水冲洗30s;
12.伊红复染1-2min,自来水冲洗30s;
13.脱水、透明,步骤2反向进行;
14.封片:中性树脂,加盖玻片(组织部位切勿残留小气泡),自然晾干。
三、染色结果
细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色,细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。
转自:“精英汇科研服务”微信公众号
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