高品质高质量病理检测（二十四）—IF-单标/双标/三标
2023/9/11 15:44:59 阅读：42 发布者：
一、染色原理
免疫荧光技术（Immunofluorescence technique ）又称荧光抗体技术，在免疫学、生物化学和显微技术的基础上建立起来的一项技术，是利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。
二、染色步骤
免疫荧光染色
1.实验时取出切片，恒温干燥箱中60°C干燥20min；
2.用含3% TritonX-100的PBS室温下洗3次，每次5min；
3.用含3% TritonX-100及5% FBS的封闭液（Blocking buffer）常温下封闭1 hr；
4.4 ℃下孵育一抗过夜；
5.常温下PBS洗3次，每次5min；
6.常温下孵育荧光二抗2hr;
7.PBS洗3次，每次5min；
8.用5 µg/mLDAPI工作液在常温下孵育5min；
9.再PBS常温下洗3次，每次5min；
10.抗瘁灭剂封片剂封片，37°C烘箱中稍作烘干直到盖玻片不自行滑动；
11.荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜采集图片。
三、注意事项
1.冰冻切片动物一般需要灌注；
2.冰冻包埋—取组织放在含有OCT包埋剂包埋；
3.冰冻切片—将OCT包埋的组织在-30°C的Chamber temperature（CT）及-20°C的object temperature（OT）下切片；切片室温干燥过夜，置-20°C冰箱保存。
转自：“精英汇科研服务”微信公众号
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