甲基莲心碱通过调节AMPK通路改善非酒精性脂肪性肝炎

今天为大家分享的是云南农业大学Sheng Jun等人于2023.6发表于Phytomedicine上的研究论文“Neferine ameliorates nonalcoholic steatohepatitis through regulating AMPK pathway”，本文探寻了甲基莲花碱（NEF）改善NASH的关键机制，发现NEF不仅增强了AMPK和ACC磷酸化，还降低了炎症反应和纤维化。

已有研究表明，AMPK 的缺失会加剧NASH 病理特征，揭示激活 AMPK 信号将有助于改善NASH。NEF是梅花中提取出来的一种双苄基异喹啉生物碱，已被证实有抗炎、抗氧化和抗肺纤维化活性，同时，在预防和治疗对乙酰氨基酚引起的肝毒性损伤方面发挥作用，此外， NEF的特征是毒性和副作用低，对糖尿病小鼠的肝脏和肾脏没有损害作用，表明NEF是一种具有广泛开发利用价值的安全化合物。     

首先作者测试了NEF对 HepG2细胞脂质积累和肝细胞凋亡的影响，油红O染色显示NEF以剂量依赖性方式显着降低OA诱导的细胞脂滴积累，在浓度为25μM的时候可以显着降低早期和晚期细胞凋亡。同时，通过WB结果显示，给药NEF可以降低FAS，SREBP-1C和PPARγ的表达，又增强了SIRT2和ATGL水平，为了阐明NEF发挥其代谢调节活性的潜在机制，在OA刺激的HepG2细胞中检测了AMPKα和ACC的磷酸化，结果表明OA暴露降低了p-AMPK和p-ACC，但在12.5 μM和25 μM时NEF显著恢复。这些结果表明，NEF处理通过激活肝细胞中的AMPK途径减少脂质积累并促进β-氧化。

图1.NEF通过影响AMPK途径降低细胞脂质水平     

接下来作者使用qRT-PCR技术检测TNF-α的mRNA水平。结果表明，NEF处理降低了LPS诱导的TNF-α mRNA水平，且显著降低了TLR4表达、NF-κB p65磷酸化和蛋白质水平。此外，促纤维化基因COL1A1、α-SMA和TGF-β的表达也受到抑制。这些数据表明，NEF通过抑制TLR4 / NF-κB p65信号通路来减轻NASH相关的炎症，通过抑制TGFβ-Smad2/2途径部分减轻了LX-3的纤维化。

图2.NEF抑制TGFβ-Smad2/2途径       

为了进一步确认NEF是否通过AMPK途径降低脂质代谢和炎症，在OA和NEF治疗之前，用AMPK抑制剂化合物C（CC）和AMPK激活剂AICAR预处理HepG2细胞，以评估NEF对AMPK活化的基本要求。结果表明，AMPK阻断和激活对应消除和激活NEF对HepG2细胞脂质积累的保护作用。       

之后作者在体内实验中证实，用NEF和OCA治疗4周后，肝脏大体外观更紧，肝细胞和脂滴的气球变性减少，抑制了参与脂肪生成的基因，并增加了Atgl、Sirt1、Pparα和Cpt1a的表达。蛋白质印迹测定显示，NEF和OCA处理显着减弱了NASH小鼠炎症蛋白并下调了下调炎症基因，以上结果说明，NEF不仅可以改善肝功能、抑制肝脏炎症、改善肝纤维化，还可以抑制NASH小鼠的脂肪生成并促进β氧化。

图3.NEF抗NASH机理       

本研究证明，NEF通过抑制肝脂质积累、炎症反应和纤维化来改善NASH的发病机制来自NEF激活AMPK的能力，这可能是NASH的潜在和新疗法。

https://doi.org/10.1016/j.phymed.2023.154798

转自：“如沐风科研”微信公众号

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