冰冻切片（frozen section）是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。其种类较多，有低温恒冷箱冰冻切片法、二氧化碳冰冻切片法、甲醇循环制冷冰冻切片法等。
冰冻切片操作步骤：
冰冻切片实验操作注意事项
1. 接收标本
送检标本时，要用干净的标本袋装好及时送往检验，切忌浸入生理盐水、固定液、乙醇以避免冰晶的形成。
2. 取材
取材台面和器械要保持干净无污染，含血或者含水较多的组织取材时要用干纱布将血液和水分充分吸干，防止产生冰晶、空洞。
取材要保证组织最大切面平整，取材组织大小一般为2cm×1.5cm×0.3cm，厚度适中，组织块太大贴片困难，太小不利于诊断，太厚冷冻时间长。
取材时应避开出血坏死区，取淋巴结尽可能将周围脂肪剔干净，如淋巴结最大直径＞0．5cm，则应对剖全包。应尽量剔除骨组织及钙化组织，防止切片困难，尤其是防止对冰冻切片机造成的损坏。取小标本要用干纱布托住，防止丢失。
3. 包埋
包埋前用干纱布尽量吸干组织水分，选用进口包埋剂OCT(聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物)，具有减少皱褶及刀痕、减少冰晶形成、增加组织切片连续性的优势。
将取好的组织块放于冰冻托中央，放入适量OCT，迅速放入冰冻机内。囊皮样组织应立埋，使切面含囊壁全层，利于诊断。较小的组织需先提前加OCT，当OCT半凝时，再放入小组织进行包埋。
4. 冷冻的时间和温度
4.1冷冻温度
平时将冰冻切片机温度设定为－24℃，24h待机状态，工作中应根据送检组织类型设定不同的温度:含脂肪组织－30～－25℃，脂肪组织温度更低为－30℃以下，含脂肪的乳腺－30～－22℃，子宫－25～－23℃，肌肉组织、皮肤－26～－22℃，淋巴结－20～－18℃。
4.2冷冻时间
根据送检组织的类型调整不同的冷冻时间，含脂肪较多的组织8～15min，子宫肌瘤、卵巢纤维卵泡膜细胞瘤等组织较致密冷冻时间不宜过长，会使组织变硬，造成切片困难。
4.3恒冷箱的温度
一般在冷冻后10分钟，到接近冷室温度时再切，一般组织在－15～－20℃切片最易成功。每种组织有其合适的切片温度、刀的温度和冷室温度，常见组织适应温度如下：
5. 切片
包埋剂从四周开始冷冻，逐渐向中间变硬变白，当全部变白时是切片最佳时机。将冰冻托放置刀头，缓慢倒退至合适距离开始粗修片，进刀幅度不要太大，切片厚度4～6μm，细切片时用力缓慢均匀，修平组织直至暴露最大切面，必要时可连续多个切面切片，防止没有切到位。贴片时载玻片一定要干净，防止污染及掉片。
抗卷板的前缘与刀面须有足够的距离，使切片平滑通过。抗卷板略高于刀面的最高点。可凭经验调整刀对组织的角度，一般新刀为20゜。
操作程序：先接通电源，调定恒冷箱温度，调整切片刀的角度，调定切片厚度，标本置载台致冷达所需温度后，将其安放在切片机推进器上。即可切片。恒冷箱视使用情况每周或每月清洁一次冰霜。新刀切片满意，旧刀用自动磨刀机磨刀较好。如果切片刀与抗卷板的位置，角度合乎要求，又有一把锐利的刀，就能获得理想的切片。
冰冻切片常见问题及解决方案
1. 组织取材对制片的影响
组织取材大小：
组织块大小要适宜，冷冻切片机内切片刀移动的范围有一定的限制，超出其范围时，易致切片不全，一般情况下，冰冻切片的组织大小为1.5*1.5 cm厚2 mm。（卵巢及脂肪组织可稍微大些）组织块过大，切片时阻力过大，易产生皱折、刀痕，组织易崩碎，增加制片难度，影响观察诊断。
组织内含过多的脂肪或坏死组织：
脂肪或坏死组织较一般的组织冷冻的温度要低些，当活组织达到所需的温度时，脂肪或坏死组织还比较软，从而影响切片的完整性和检测发出的时间。
组织块过冷：
组织冷冻过度易致切片破碎或呈粉沫状，不能制作一张完整的切片。
组织块冷冻不均匀：
组织块放入液氮时不能保持水平状态且液氨量不足的情况下，可产生此现象。
2. 冷冻时间、温度对制片的影响
根据组织块的大小性质确定冷冻时间一般13~17 s(使用液氮者)，若组织较大或脂肪组织时间可适当长些，而甲状腺、脑组织和淋巴组织等冷冻的时间相对要短些。
3. 染色对制片的影响
尤以细胞核的染色最为关键，在寒冷的冬季，室温过低时，影响核的着色，可适当加温，用以增色；苏木毒的酸碱应适宜 ，经常观察其染液的n值，过碱时应及时更换，盐酸酒精分化活度，时间控制到位，否则易造成核着色不佳，染色质不清晰，影响诊断的准确性。
4. 冰晶的形成对制片的影响
常见原因：
取决于组织含水量的大小，尤以组织细胞水肿，淋巴结，纵隔肿瘤，卵巢肿瘤为甚，送检取材过程中接触水源，同是造成冰晶形成的原因。
解决方法：
使用液氮时间上控制到位，保证一次冻透标本1.组织送检取材时，尽量避开水源2.如遇含水量高的标本时，应尽量用干纱布吸干水分后再行冷冻。
5. 切片皱缩或卷缩对制片的影响
常见的原因：
①刀锋变钝。
②防卷板粘有异物，防卷板的作用是防止切片卷缩，但若粘有异物，切片时组织会被挤压而缩在一起。
③防卷板与刀锋的位置不平行、不协调。
④组织块包埋不完全，缺乏支撑作用。
解决方法:
①注意检查刀具，及时更换刀口，定期磨刀。
②保持防卷板的清洁，每做一例冷冻切片，均应将刀口及防卷板拭擦干净，防止切片的污染和切片皱缩。
③调整刀、防卷板的位置，保证两者平行，且防卷板次刀锋前0.2 mm左右。包埋组织应完全，没法切片者再滴加包埋胶。
6. 组织块脱落对切片的影响
冷冻切片一般要求在30min内发出病理报告，以便手术医生能尽快选择手术方式。
常见原因:
①组织内含过多的坏死组织。组织细胞坏死崩解后，局部的渗透压升高，吸收水分，切片一经固定，水分逸出，坏死组织失去支撑作用，染色时组织容易脱落.
②因际液浓度过低。
③载坡片不干净。
④切片太厚。
处理方法:
①避免组织内带有坏死组织。
②定期更换固定液。股每周更换一次，例数较多者，适当增加次数。
③保持载玻片干净，平时应将玻片盖好，防止就发申或其它异物的污染。
④调好切片的厚度，切片厚度以5~7μm为宜。
综上所述，制作冰冻切片是一项需要谨慎态度和高超技巧的工作，需要病理技术人员工作中善于观察思考总结，不断摸索、学习，理论联系实际，在实际工作中针对不同组织采用不同的制片方法，不断发现问题及解决问题，只有这样不断地努力才能制作出优质的冰冻切片，为病理诊断提供有利保障。
转自：“晶莱生物”微信公众号
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