JHM. 基于抗原驱动的CRISPR-Cas12a双信号放大的“棒棒糖”颗粒计数免疫分析用于脱氧雪腐镰刀菌烯醇的灵敏检测

以下文章来源于分析化学方法 ，作者科研小组

全文简介

脱氧雪腐镰刀菌烯醇是谷物中分布最广的真菌毒素之一，对农业环境和公众健康构成巨大威胁。因此，开发灵敏、抗干扰的脱氧雪腐镰刀菌烯醇分析方法尤为重要。在这里，我们建立了基于抗原驱动的CRISPR-Cas12a双信号放大的“棒棒糖”颗粒计数免疫分析(LPCI)。LPCI通过抗原驱动的CRISPR-Cas双信号放大结合颗粒计数免疫分析实现了高灵敏度和高准确度。该策略不仅拓宽了CRISPR-Cas系统在非核酸靶检测领域的适用性；它还提高了颗粒计数免疫测定的灵敏度。聚苯乙烯“棒棒糖”免疫测定载体的引入进一步实现了多个样品的有效同时预处理，并克服了真实样品中复杂的基质干扰。脱氧雪腐镰刀菌烯醇的LPCI线性检测范围为0.1–500 ng/mL，检出限为0.061 ng/mL。该平台极大地扩展了CRISPR-Cas传感器用于检测环境和食品样品中非核酸危害的范围。

简介

“棒棒糖”颗粒计数免疫分析的图示(LPCI)。(A)使用“棒棒糖”载体进行样品处理的策略。(B)由抗原和CRISPR-Cas12a供电的双重信号放大和信号转换的原理。

“棒棒糖”颗粒计数免疫分析的图示(LPCI)。(A)使用“棒棒糖”载体进行样品处理的策略。(B)由抗原和CRISPR-Cas12a供电的双重信号放大和信号转换的原理。

切割活性的验证。(A)FQ+Cas12a/crRNA+激活剂。(B)FQ+cas 12a/crRNA+DON-BSA-激活剂。(C)PS-报告者-MNP的SEM图像。比例尺为1 m. (D) CRISPR-Cas12a介导的裂解可行性论证。橙色条:PS-报告者-MNP，绿色条:PS-报告者-MNP + Cas12a/crRNA，紫色条:PS-报告者-MNP + Cas12a/crRNA +激活剂，黄色条:PS-报告者-MNP+cas 12a/crRNA+DON-BSA-激活剂。

LPCI和ELISA检测DON的分析性能。（A）标准曲线和（B）用于检测DON的LCPCI线性范围。（C）用于检测DON的ELISA的标准曲线和（D）线性范围。

DON、ZEN、OTA、AFB1、AFG1和AFM1的结构。(B)调查不同干扰真菌毒素的特异性(DON: 100纳克/毫升，干扰物:100纳克/毫升)。(C)LPCI、HPLC-MS/MS和ELISA检测玉米样品中DON的比较。“×”表示“未检出”，表示DON的浓度不在ELISA的检测范围内。“√”代表被DON污染的样品。

相关成果以“"Lollipop" particle counting immunoassay based on antigen-powered CRISPR-Cas12a dual signal amplification for the sensitive detection of deoxynivalenol in the environment and food samples”，发表在国际学术期刊“Journal of Hazardous Materials”上。

文献链接：点击阅读原文

https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2023.131573

转自：“NANO学术”微信公众号

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