2022年5月26日/医麦客新闻 eMedClub News/--很多读者对流式细胞分选技术都非常熟悉，因其筛选速度快、可标记指标多、特异性强、灵敏度高等特点，在药物研发多个环节中发挥着重要作用。此次小编专门摘取了6个常见的应用场景抛砖引玉，和大家一起来探讨常见技术如何应用到极致，更好的助力我们自己的生物医药研究！
新冠病毒抗体药物研发
案例：首个中国本土新冠治疗性抗体药物获得批准！（Nature, IF= 49.962）
2021年12月，国家药品监督管理局应急批准中国首个新冠病毒中和抗体药物安巴韦单抗注射液（BRII-196）及罗米司韦单抗注射液（BRII-198）注册申请（腾盛华创）。
研发技术路线：
1.康复血清中分离SARS-CoV-2 RBD 特异性单个B细胞
2.对筛选到的206个抗体进行序列分析，获得配对的重链和轻链序列
3.重组单克隆抗体与RBD结合能力评估
4.抗体结构解析，筛选精英抗体进入临床试验
流式分选如何发挥作用：
此文中，特异性Memory B细胞仅占比0.092-0.73%，属于稀有细胞亚群。使用流式分选技术可以使用多指标标记，对稀有细胞准确识别，从而快速筛选出来，加速整体抗体开发的进程。（所用设备：BD FACSAria™III流式分选仪）
HIV/HBV中和抗体分离
案例：单个B细胞抗体筛选在HIV和HBV中和抗体分离上的应用
单个B细胞抗体筛选技术具有效率高、轻重链天然配对、全人源等优势，是目前快速筛选病毒中和抗体重要策略。流式分选是目前单个B细胞分离常用的方法之一。
流式分选如何发挥作用：
在这两项研究中，流式细胞分选仪用于检测和分离HIV-1BG505和HBV S蛋白特异性记忆B细胞：多个抗体标记将稀有的、特异性B细胞分选至96孔板中，裂解、PCR获得HIV及HBV抗体编码序列，为治疗抗体及疫苗开发奠定基础。
（所用设备：BD FACSAria™III流式分选仪）
超免疫球蛋白药物
案例：血液制品巨头Grifols开发新冠超免疫球蛋白药物（Nature Biotechnology, IF=54）
血液制品包括免疫球蛋白、恢复期血浆等，是新冠“特效药”的技术路线之一。Grifols和美国FDA合作的新冠 “重组超免疫球蛋白”疗法（GIGA-2050）已获研究性新药 IND 批准。
研发技术路线：
1.B细胞分离和免疫球蛋白Ig编码基因序列获取
2.酵母展示系统富集抗原特异性免疫球蛋白
3.超免疫球蛋白载体构建和CHO细胞生产
流式分选如何发挥作用：
研究使用高通量酵母展示技术，进行新冠高亲和力免疫球蛋白筛选。经过两轮流式分选与富集后，抗体库的靶向率由0.99% 提高至36%。短时间内将抗体库特异性抗体提升近40倍，提高整个研究项目速度。
（所用设备：BD FACSMelody™流式分选仪）
疫苗疗效
案例：BioNTech mRNA黑色素瘤疫苗 (BNT111)I期治疗效果探索（Nature, IF= 49.962）
BioNTech开发管线中mRNA黑色素瘤疫苗(BNT111)I期临床数据，此款疗法已被美国FDA授予快速通道资格（FTD）
研究结论：
1.RNA-LPX接种后，细胞免疫反应被高倍激活，血浆细胞因子含量增加
2.RNA-LPX可作为单一疗法，也可以与抗 PD1 治疗协同作用增强抗肿瘤作用。
3.肿瘤相关抗原TAA可以作为肿瘤疫苗的靶点
流式分选如何发挥应用：
研究中使用流式分选仪中专有的Single Cell Sorting(单细胞模式)分选T细胞，用于下游检测疫苗接种后的细胞免疫。分选抗原特异性T细胞(占比低至0.48%), 获取TCR序列，为疫苗诱导的细胞免疫反应的评估提供了重要数据。 （所用设备：BD FACSMelody™、FACSAria™流式分选仪）
细胞治疗
案例：新型的多肽中心CAR T细胞疗法为实体肿瘤的靶标选择提供了新思路 (Nature, IF= 49.962)
费城儿童医院的研究团队开发了一种针对神经母细胞瘤的多肽中心CAR-T细胞疗法（PC-CAR T），引起细胞治疗领域内的热烈讨论。
研发技术路线：
1.神经母细胞流中特异性抗原的鉴定，确定多肽PHOX2B作为靶标
2. 靶向PHOX2B的PC-CAR T改造
3. PHOX2B 特异性10LH PC-CAR T 细胞诱导有效的肿瘤杀伤
流式分选如何发挥应用：
使用流式分选仪进行肿瘤多肽特异性、用于下游T细胞的改造和获得特异性PC-CAR T的抗体筛选。同时开展4轮抗体蛋白展示文库筛选，短时间内筛选出大量的PC-CAR T细胞携带的抗体。（所用设备：BD FACSMelody™流式分选仪）
细胞株构建
经验分享：细胞克隆筛选流程优化宝典，让细胞株开发更高效
获得表达水平高、稳定性好、易于放大培养的细胞株对于生物制药中抗体和重组蛋白的生产、药物筛选等至关重要。流式分是目前常用的高效筛选细胞单克隆的方法之一。
转自：博舜科研
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