细胞侵袭实验详解剖析

以下文章来源于医学僧的科研日记 ，作者WKP

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上次我们分享了研究细胞迁移的体外方法——划痕实验，与此同时细胞侵袭也是与转移密不可分的。那么今天要分享的是最常用的细胞侵袭方法：Transwell侵袭实验。与细胞划痕实验相比，Transwell相对过程复杂一些，下面就一起看看肿瘤细胞Transwell侵袭实验吧！

  细胞侵袭实验示意图

首先，为了对肿瘤侵袭和转移有更加清晰的理解，我们先来了解一下，肿瘤细胞转移的过程，主要包括以下5个过程：原位侵袭（Local invasion），肿瘤细胞内渗（Intravasation），循环系统存活（Survival in thecirculation），肿瘤细胞外渗（Extravasation），形成转移灶（Micrometastasis formation）等。其中细胞侵袭便发生在第一步，即肿瘤细胞在原位突破基底膜，然后内渗进入血管、淋巴管的过程，后期才开始进行转移。

  肿瘤细胞转移的过程  

Trans可译为转移，穿过，而well则为小室的意思。外形如同一个小杯子（如下图），杯底有通透性的膜（孔径0.1－12.0µm，细胞侵袭一般用8.0、12.0μm）。

Transwell原理简单来说，就是将Transwell小室放入培养板中，并将高营养液与低营养液用一层膜隔开，并在膜上室铺基质胶，用来模拟体内细胞外基质。肿瘤细胞放在低营养液中，为了获得更多的营养吃的更饱，这些细胞需先分泌基质金属蛋白酶（MMPs）将基质胶降解，才能穿过这层膜，进入高营养液，最后通过计数下室的细胞量即可反映肿瘤细胞的侵袭能力。细胞Transwell实验，可作为一种非常简便的研究肿瘤细胞迁移、侵袭以及转移情况的方法。

实验做完后就是最重要的结果统计了！

检测穿过的细胞数一般有两种方法：

1.直接计数法

①“贴壁”细胞计数

这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。可以通过给细胞染色（如结晶紫染色、台盼蓝染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色），在镜下计数细胞。

②“非贴壁”细胞计数

由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室。这种情况下可以收集下层培养液，用流式细胞仪计数细胞量，也可用细胞计数的方法直接在镜下计数。

2.间接计数法

间接计数法主要用于穿过细胞过多，而无法通过计数获得准确的细胞数所采用的方法，通过标记、染色处理（例如MTT法、荧光试剂检测、结晶紫检测）后，测量OD值或荧光值，间接反映细胞数量。

文章中出现的Transwell侵袭实验图一般是这样的：

（小tips：NC 即Negative control，表示阴性对照，siRNA上期刚说过，大家还记得吗？

文章中大家可能还会遇到MOCK组，其实就是空白对照。所谓的空白对照有两种：一种是什么也不处理，类似阴性对照组；一种是只加转染试剂，不加转染的质粒或者siRNA，类似假手术组）

这张图表示的是NC组（对照组）细胞侵袭少于siRNA组（沉默某基因的表达），可以理解为沉默某基因后，可以促进HGC-27细胞的侵袭。

当然，这张图是比较简单的，复杂一点的无非就是条件多了，数据多了，大家只要理清楚细胞侵袭实验的原理，知道图是怎么做出来的，对应着图注都可以很轻松的理解图所表达的意思。

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