陈海如教授与陈剑平院士团队利用Cre/loxP重组技术优化辣椒轻斑驳病毒嵌合体病毒载体构建技术

植物病毒全长cDNA侵染性克隆是病毒生物学特性研究的重要工具。植物单链RNA病毒从4 kb到10 kb不等，全长侵染性克隆构建以及载体改造工作操作难度较大。Cre-LoxP重组系统多用于转基因筛选标记基因敲除，植物病毒载体改造方面应用较少。

近期，云南农业大学陈海如教授团队与宁波大学陈剑平院士团队合作完成的题为“Construction of chimeric viruses based on pepper mild mottle virus using a modified Cre/loxP system”的研究论文在Journal of Integrative Agriculture (《农业科学学报》(英文)，JIA) 2022年8期发表。

该研究利用Cre/loxP重组原理构建了辣椒轻型斑驳病毒 (Pepper mild mottle virus, PMMoV) 的嵌合体改造系统。通过构建Cre表达后自敲除的瞬时表达载体 (ploxP-Cre)，有效缓解了Cre重组酶在本氏烟叶片上引起的坏死。同时将PMMoV基因组分段构建成pJM23 (1-5628 nt)，pJG1040 (5629-6356 nt)，该载体与ploxP-Cre共注射，可实现体内重组，并完成PMMoV的复制侵染，在系统侵染叶片中检测到大小为300 nm×18 nm的杆状病毒粒子。与构建的全长侵染性克隆相比，Cre/loxP重组载体的系统侵染效率无明显差异。同时构建的pJG1024 (绿色荧光蛋白通过手足口病毒 (foot-and-mouth disease virus, FMDV) 2A蛋白与外壳蛋白融合) 和pJGTZSV (PMMoV的外壳蛋白替换为番茄环纹斑点病毒的核壳体蛋白) 嵌合病毒载体，分别与pJM23、ploxP-Cre共浸润，可实现嵌合病毒的系统侵染。

该重组技术为较大基因组病毒构建以及嵌合体病毒改造提供了一个新的方法。

宁波大学彭杰军博士、陈剑平院士和云南农业大学陈海如教授为该文章的通讯作者，云南农业大学尹跃艳为第一作者, 该研究得到了国家重点研发计划 (2019YFD1001800)、国家现代农业特色蔬菜产业技术体系 (CARS-24-C-04)、宁波市公益类科技计划项目 (202002N3005) 和宁波大学王宽诚教育基金的资助。

点击链接查看全文：https://doi.org/10.1016/S2095-3119(21)63864-9

转自：植物科学最前沿

如有侵权，请联系本站删除！