细胞实验想发高分？这些培养技巧不得不会！

细胞实验是医学基础研究绕不开的一类基础实验，常见的有动物细胞培养一般有传代细胞培养和原代细胞培养。传代细胞培养较为简单，依托于稳定的商业化细胞系，其实验易于上手。

原代细胞直接取材于活体组织，实验和培养的难度较大。而且原代细胞作为更接近体内环境的研究模型，在研究中有着传代细胞不可替代的重要性。

如何才能将原代细胞养好？如何稳定原代细胞性状保持实验的稳定性？如果大家有相关实验的需求，建议大家进行收藏订阅，同时丁香实验也整理了这类细胞培养的相关技术和方法帮助大家进行提升：

细胞原代培养，需要重点关注以下几点：

一、组织选材

根据自身实验的需求不同，所需要培养的原代细胞的选材组织有所不同。下表整理了常见组织取材以及操作注意事项：

二、细胞原代培养步骤示例

自取材开始，所有操作应该在无菌环境下进行。以下以小鼠肝脏原代细胞培养为例，进行步骤详解：

选材好的组织移入 50 ml 离心管内，用无菌眼科剪将组织处理为 1 mm3 的小块。随后 1000 rpm，5 min 离心；

视组织的量加入 5~6 倍的胰酶，37 ℃ 消化 20 分钟。期间每隔 5 min 可以轻柔吹打一次；

加入 3~5 ml 含有血清的培养基中止消化反应，随后将悬液过100 目孔径筛网过滤，进行离心；

加入无血清培养基 5 ml，轻柔吹打冲散，再次离心后加入含血清培养基1~2 ml；

细胞计数后，按照 5 × 105/ml 进行培养。

三、关键细节需要注意

原代细胞培养过程较慢，培养时间最少需要一周以上的时间。若 2 天后出现培养基变黄现象，且无漂浮物，可以排除污染，属于细胞生长产生 CO2 所致；

原代细胞不建议冻存，冻存可能对性状有所影响，如果必须冻存建议提高冻存液内的血清浓度；

很多原代细胞的体外培养需要加入生长因子，具体添加哪类因子，需要根据实验需求查阅文献；

消化时，如果过度消化可以降低胰酶浓度以及消化时间。如果长时间难以消化，建议在胰酶使用前可以进行37 ℃ 预热，并延长消化时间。

转自：“生物学霸”微信公众号

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