国自然项目申请书撰写技巧——立项依据该怎么写？

书接上回，我们的立项依据框架在预实验的加持下才能够更加丰满、立体且富有创新性，那么写作时要注意哪些要点呢？

国自然项目立项依据一般字数在3500左右（不包含参考文献），合理写作逻辑：

（1）临床问题（突出现阶段的不足之处，从诊断和治疗讲，也就是提纲中所提到的结合国民经济和社会发展中迫切需要解决的关键科技问题来论述其应用前景；目前专家对于标书临床意义的考量占据很大一部分比重，所以一些已经有所谓特效药的疾病方向不适宜申请，特别是中医药领域想用某些单体或复方替代现有药物需要慎之又慎，要有非常扎实的临床数据作为佐证，例如单一使用肿瘤免疫疗法XX癌患者五年生存率为XX%，联合放疗后五年生存率显著上升；这一临床问题可以是自己经验总结，也可以是一些大的流行病学调查报告所报道，那我们这份标书就是选择一个点去揭示这一临床现象）→科学问题（科学问题的提出是标书的核心内容，要紧扣你所想要突出的临床意义，从临床科研转向基础科研，从疾病现象转向导致这一疾病现象的某些关键功能细胞表型的改变，例如肿瘤发生过程中的炎癌转化、肿瘤发展过程中的增殖、侵袭、转移能力增强，肿瘤干细胞干性维持等；非肿瘤疾病中的例如骨质疏松发生过程中骨生成作用减弱可以关联到成骨细胞异常死亡、髓源间充质干细胞成骨分化能力减弱等）→从临床样本或动物模型入手（即个体水平，功能水平，一些没有临床样本的疾病就一定要有国际公认的可以代表该疾病的动物模型，如果都没有就换临床方向，巧妇难为无米之炊），然后细胞、分子机制渐入式推进阐明分子之间关系（物理上、功能上；从逻辑连贯性角度考虑一定是“临床--细胞表型异常--标志基因改变--主角基因调控机制”这样一条线索链，如果直接突兀的引入机制容易造成专家评审认为你有蹭热点之嫌疑），因为看不懂机制时，专家会优先评估项目的逻辑性、可行性强不强，看他能看懂的东西；

（2）国自然基金重在科学假说的合理性、创新性、明确性、科学性、逻辑性、完善性，缺一不可。但是点到为止，既要证明该假说的合理，又不能把所有的实验都做完，是一个拼图游戏，（但该做的预实验还是要做，而且不能仅仅只有生信预测数据和图片，一般来说主要信号轴上的分子以及干预手段与疾病或者细胞表型的相关性是一定要做的，而具体分子结合关系是可以用在线数据库例如SRAMP、STRING、KEGG、Transcirc等预测的）所以这里面分子机制的实验数据列举需要有个度，假设分子机制由3级分子参与：A分子→B分子→C现象（细胞表型）以及D通路组成。那么要这样开展立项撰写：

①首先体现一下临床样本上（或者动物模型）的分子检测指标:血清学、组织病理学。将临床问题和某种细胞表型或者分子表达水平异常联系起来；（即ELISA、IHC、WB、qPCR等检测A、B以及C表型marker基因C1、C2等相关性，如果临床数据比较全也可以加上，然后做这些分子指标与临床指标的相关性分析）

②在细胞水平，A的敲减或者过表达（尽量不要同时，但可增加时间梯度）对于分子B表达、C现象的干预检测，D通过信号通路或者marker来证明合理推导出C现象以及某信号通路受到A的直接上游调控；（然后单独推导出B，C等的时候也可以加做B的敲减或过表达，C的抑制剂或激活剂处理等）

③ B的敲减或者过表达干预（功能挽救实验）能够在表型上以及表达水平上逆转A造成的表型结果， C表型的检测（markers基因已知，例如检测焦亡要检测Casepase-1、IL-18等）；前期预实验里需要体现的实验数据有1: A和B的表达相关性作图；2：B的敲减或者过表达干预能够逆转A介导的C表型；3：A和B需要有个数据库预测或者某篇文章证明其有物理上的结合。（肿瘤需要加做该肿瘤商品化细胞系以及原代细胞系的A分子表达筛选，确定研究的主要细胞系）

④动物实验：这个做的时候一定要说，用的动物模型数量很少，而且最多做一下A基因的敲减或者过表达实验，简单检测一下表型即可，不可体现太多的工作量；国青和地区项目尽量少用条件性敲除等转基因技术，这太贵了，技术难度大，当然如果实验室有已经构建完成的转基因小鼠鼠或者大鼠可以写，预算里面这一块就不要加进去了。（肿瘤研究一般就简单看一下成瘤速率等简单表型就行，非肿瘤如果细胞的实验没有很好的对象或者很复杂的情况下可以多测一点指标，比如疗效或者药物敏感性等等；近几年治疗类肿瘤项目很流行用PDX模型，这个也可以加上，回头我单独在研究关键技术一部分为大家详解PDX模型技术）

⑤研究内容中A/B作为临床诊疗手段的打算（单因素、多因素回归分析统计；项目如有临床样本也可加入，需增加伦理说明）

⑥ 然后剩下的要讲未来要做的研究内容，研究内容讲的是把细胞系（如何培养，原代细胞还是商品化细胞系）、动物数量（造模方式是否有发表SCI，如未发表最好在前期基础单列造模一栏并附注详细图片）、临床样本的数量增加，其他的还包括：我们还需要增加各个分子干预技术在剂量梯度、时间梯度上，在临床上、动物模型上、细胞模型上的实验，坐实该分子A\B的临床应用潜力；进一步通过分子生物学、细胞生物学、免疫生物学技术明确A分子→B分子→C现象以及D通路的分子机制，提供治疗靶点和新的诊疗思路；评估A/B作为该疾病的临床预后判断模型的潜力，等等。

这样，标书立项依据就算完成了。

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