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根据孔数、形状、处理方式、颜色选择细胞培养板的方法

2024/2/1 16:14:56  阅读:43 发布者:

细胞培养是一种基本的生命科学研究技术,已成为现代生物医学研究的重要手段。细胞培养板是细胞培养实验中常用和重要的实验室耗材,选择合适的细胞培养板对细胞的生长和实验结果的准确性有至关重要的影响。

细胞培养板根据底部形状的不同可分为平底、圆底(U型)和V底(V型);培养孔的孔数有6122448963841536孔等;表面处理方式有TC处理和超低吸附处理;颜色有透明色、白色、黑色等。那么如何从这么多的规格中选择适合实验的细胞培养板呢?

1

孔数的选择

细胞培养板的孔数包含6孔、12孔、24孔、48孔、96孔和384孔。不同孔数的培养板能培养的细胞数量不同(见表1),最终的应用场景也会不同。如何选择孔数主要根据实验所需的通量水平以及具体的实验要求来决定。例如WB、流式检测相关实验,需要较多的细胞样本量,最终的检测通量较低,一般会选择6孔板、24孔板;又如CTG实验、CCK8实验、MTT实验,实验通量较高,最终的检测手段可以实现自动化,多数可以选择96孔板或者384孔板。

培养板类型

面积(cm2

培养液量(mL

细胞量

6孔细胞培养板

9.6

2.5

2.5×106

12细胞孔培养板

4.5

2.0

106

24细胞孔培养板

2

1.0

5×105

96细胞孔培养板

0.32

0.1

105

 

2

底部形状的选择

细胞培养板根据底部形状的不同主要分为平底、圆底(U型)和V底(V型)三大种。平底可用于任何类型细胞培养,是我们日常细胞培养实验中使用最多的。一般针对特殊实验需求会用到圆底(U型)和V底(V型)培养板,日常实验中用的较少。圆底(U型)多用于培养悬浮细胞,例如免疫学实验需要两种不同淋巴细胞混合培养时,需要二者相互接触以刺激,圆底(U型)板可利用重力将细胞聚集在小范围内。V底(V型)板中细胞紧密接触,一般用于细胞杀伤实验,可使有效靶细胞紧密接触[也可用圆底(U型)板替代,加入细胞后,低速离心即可]

3

表面处理方式的选择

细胞培养板的处理方式主要有TC处理和超低吸附处理。选择哪种表面处理方式,主要取决于培养的细胞是贴壁细胞还是悬浮细胞。细胞培养板一般采用的原材料是聚苯乙烯,这一材料具有疏水性。对于贴壁细胞而言,需要贴附在亲水表面侧能生长。

经过TC处理的细胞培养板,表面改性后更适合贴壁细胞的培养。超低吸附处理是将特殊的两性分子聚合物镀膜至培养板表层,可有效抑制细胞附着,从而满足悬浮细胞培养的需求。因此对于贴壁细胞可选择TC处理细胞培养板,对于悬浮细胞可选择超低吸附处理细胞培养板或者未经任何处理的细胞培养板。

4

细胞培养板颜色的选择

细胞培养板的颜色与应用息息相关。细胞培养板的颜色主要有透明、白色、黑色。如果用相差显微镜或肉眼观察细胞,可选择透明的细胞培养板。对于可见光光谱以外的应用(如冷光或荧光),就必须使用有颜色的细胞培养板(如白色或黑色)的。

在使用从顶部读数的仪器时,底部应该是不透明的,而使用显微镜或底部读数的仪器时,应选择底部透明的培养板。冷光样品通常选择白色表面,以便最大限度提高信号的反射率,而大于300nm的荧光应用时通常使用黑色表面,以吸收激发信号。同时有颜色的表面还可以防止相邻孔之间的信号串扰。具体应用所采用的不同颜色培养板总结如下:

1)发光检测(冷光)—白色细胞培养板,以便最大限度提高信号的反射率;

2)荧光检测(荧光)—黑色细胞培养板,以吸收激发信号,可以防止相邻孔之间的信号串扰;

3)顶部读数—底部不透明的细胞培养板。

显微镜或底部读数—底部透明的细胞培养板。

5

细胞培养板与酶标板的使用辨别

酶标板作为固相载体对抗原、抗体或抗原抗体复合物的吸附起着重要作用,可广泛应用于低紫外区的DNARNA定量及纯度分析(A260/A280)和蛋白定量(A280/BCA/Braford/Lowry),酶活、酶动力学检测,酶联免疫测定(ELISAs),细胞增殖与毒性分析,细胞凋亡检测(MTT),报告基因检测及G蛋白偶联受体分析(GPCR)等实验。相比于细胞培养板,酶标板需要尽量降低实验误差,制作要求高,价格也相对较高。96孔细胞培养板和酶标板有一定的功能交叉,它们使用上有哪些区分呢?

1、细胞培养板可以当酶标板使用吗?

当测试可见光波长的吸收值时,大多数96孔板透明板都可以用。但是当测试高精度和特殊波长,为避免孔板产生的吸收造成的影响就要用特殊的酶标板。

2、酶标板可以当细胞培养板使用吗?

酶标板没有进行贴壁处理,是不可以用来培养贴壁细胞的。

3、测吸光度可以用细胞培养板吗?

细胞培养板可以进行吸光度的检测,经常用它来做样品的蛋白定量等。

转自:Super Lab”微信公众号

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