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[摘要]:PCR反应的特点是具有较大扩增能力与灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。1污染原因:1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染,或标本放置时,由于密封不严溢于容器外,或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中,由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散,导致彼此间的污染。2、PCR试剂的污染:... [发表时间:2024/2/1 16:21:40]
[摘要]:大家在qPCR实验过程中,是否会经常遇到异常扩增曲线和熔解曲线的困扰,比如断裂的扩增曲线、复孔间重复性不好、熔解曲线杂峰.....甚至还有其他千奇百怪问题,令人头大~01什么是扩增曲线和熔解曲线对于荧光定量PCR结果的判断,最直观就是看扩增曲线是否「漂亮」,即扩增曲线是否符合正常标准。如果是做染料法qPCR,还需要检查熔解曲线是否符合标准。扩增曲线是随着PCR反应的进行,扩增产物不断积累,荧光信号... [发表时间:2024/2/1 16:19:54]
[摘要]:随着分子生物学、结构生物学、基因组学等研究的不断深入,人们意识到仅仅依靠基因组的序列分析来试图阐明生命活动的现象和本质是远远不够的。只有从蛋白质组学的角度对所有蛋白质的总和进行研究,才能更科学地掌握生命现象和活动规律,更完善地揭示生命的本质。由此许多学者将生命科学领域的研究焦点从基因转向蛋白质,使蛋白质成为揭示生命活动现象和分子生物学机理的重要研究对象。研究蛋白质首要的步骤是将目的蛋白从复杂的大分... [发表时间:2024/2/1 16:22:30]
[摘要]:在养细胞的过程中,总会有一些不速来客,它们总会不请自来,比如真菌、霉菌。但最令人头疼的还是支原体,它总是悄悄的来,对细胞造成极大的危害,今天就来认识一下支原体。1支原体是什么?支原体是目前为止发现的最小的原核生物,具有以下特点:1.形态结构与细菌相似,但又比细菌小,是介于细菌与病毒之间的微生物;2.结构简单,只有细胞膜、细胞质、核糖体、DNA、可溶性RNA和一些其它细胞内含物,支原体的细胞器只有核... [发表时间:2024/2/1 16:17:28]
[摘要]:细胞冻存与复苏,是细胞培养过程中的常见工作。细胞冻存,是指将细胞贮存在超低温环境中,使细胞暂时“冬眠”的技术,在需要的时候再进行复苏。细胞复苏,是把冻存在-80℃冰箱或液氮中的细胞快速解冻,并使细胞重新恢复生长的技术。本文将为大家介绍细胞冻存与复苏的技术要点和操作步骤。细胞冻存篇冻存原则冻存原则为“慢冻”,即让细胞在缓慢降温的条件下逐渐冷冻。如果直接将细胞悬液放在超低温下快速冷冻,细胞会受到冷冻损... [发表时间:2024/2/1 16:18:21]
[摘要]:养细胞真是一件特别心累的事,不知不觉间可能就会出现很多问题,细胞不长了、不贴壁了......实在让人操碎了心。培养细胞不贴壁可能原因1.胰蛋白酶消化过度;2.支原体污染;3.培养基pH值过碱(NaHCO3分解);4.细胞老化;5.接种细胞起始浓度太低或太高。解决方法1.缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度;2.分离培养物,检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物;3.使用无菌醋... [发表时间:2024/2/1 16:20:45]
[摘要]:细胞凋亡中,染色体DNA双链断裂或单链断裂而产生大量的粘性3'-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端,从而可进行凋亡细胞的检测,这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂,因而没有3'-OH形成,很少能够被染色。由此,TUN... [发表时间:2024/2/1 16:16:09]
[摘要]:技术原理10xVisium空间转录组的技术工作原理是基于一种特殊化设计的载玻片完成样本捕获,从而空间位置标记的探针与细胞释放的RNA杂交,载玻片上原位完成反转录合成cDNA,收集cDNA,最后进行测序文库构建。一个载玻片可容纳4个切片(捕获区域),制备4个文库;每个6.5mmx6.5mm捕获区域,有5000个barcode标记的ST位点;每个ST位点有百万个UMI探针;每个位点直径55μm,点与点... [发表时间:2024/2/1 16:27:57]
[摘要]:背景介绍:在蛋白表达系统的相关研究中,从头合成蛋白质并不是一个可行的选择。因此需要借助活细胞或细胞器用作生产和构建蛋白质的工厂。利用基因重组技术将特定基因的DNA序列作为模板生成蛋白质,被称为重组蛋白。其原理是将目的基因通过电转化或者热激等手段转入合适的宿主中,利用宿主的特定生理、生化和遗传特点进行目标蛋白大量表达及纯化的生物技术。广泛应用于结构研究、生物治疗、药物开发等。本篇推文将从蛋白表达载体... [发表时间:2024/2/1 16:25:25]
[摘要]:1SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶是一种网状结构,具有分子筛效应,可以根据蛋白质和核酸分子的电荷、形状和大小来分离。包括非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(native-PAGE)和变性聚丙烯酰氨凝胶电泳(蛋白质变性剂通常为SDS,核酸变性剂通常为尿素、甲酰胺等)。... [发表时间:2024/2/1 16:18:56]
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